幹細胞馴化培養液とエクソソーム ～株式会社ボルドバイオテクノロジー/仙台製造センター

新生児の臍帯幹細胞・小児の乳歯歯髄から採取した間葉系幹細胞をゼノフリー／無血清培養して製造した幹細胞馴化培養液と臍帯幹細胞エクソソームです。

製造に使用した幹細胞は、「ヒト(同種)体性幹細胞加工医薬品等の品質及び安全性の確保に関する指針」に基づき、リアルタイムPCR法でのウイルス否定試験（HIV1, HIV2, HBV, HCV, HTLV, PVB19）と第17改正日本薬局方に基づいたPCR法による７種類のマイコプラズマ否定試験と無菌性試験（一般細菌、嫌気性菌、真菌）を実施して安全性を担保しています。また、フローサイトメトリー法で細胞表面マーカーを解析し、幹細胞の特徴である「CD90,　CD73,　CD105が陽性、且つCD45, CD34, CD11d, CD79a, HLA-DR陰性」の細胞率が90％以上である事を確認しています。

弊社で開発した完全合成培養液「αEXOM」と他社の培養液でそれぞれ製造した馴化培養液に含まれるエクソソームの含有量を比較した結果、2倍以上測定されました(図1)。

乳歯歯髄や臍帯のウォートンゼリー(Wharton’s Jelly)から、「ゼノフリー幹細胞」の分離培養と凍結保存技術を確立しました。さらに、東京医科大学 落谷教授のご指導により、高濃度幹細胞エクソソームを含む「ゼノフリー/無血清幹細胞馴化培養液」の製造方法と技術を確立しました。

「ゼノフリー/無血清幹細胞馴化培養液」の製造は、幹細胞の継代・拡大培養から馴化培養液の回収までを再生医療用の細胞加工施設に適合したクリーンルーム内で行い、馴化培養液の精製・滅菌・充填などの製品化はGMPに準拠したクリーンエリア内で実施しております。

1. 幹細胞の継代・拡大培養

   ゼノフリー幹細胞培養液「αMSCM＋PL」とアニマルフリー細胞分散酵素を用いて継代培養を繰り返し、馴化培養液の製造に必要な細胞数まで増やします。

2. 馴化培養液の製造

   培養容器表面の70〜80％に細胞が増殖した時、培養液を吸引除去し、新規開発した馴化培養液回収用の完全合成培地に置換して数日培養後、馴化培養液を回収します。

3. 品質管理

   品質管理は製造工程内と製品化後に実施されます。検査項目は、濁度、pH、浸透圧、蛋白質濃度、エンドトキシン検査、無菌性試験等を日本薬局方に準じて実施。さらに、必要に応じて50〜150nmのCD9/CD63 陽性エクソソームの量を測定します。